奥扎格雷钠对脑缺血再灌注后神经细胞的保护作用

 急性缺血性脑损伤是非常复杂的病理生理过程,主是缺血后能量代谢障碍。缺血性脑损伤是中枢神经系统功能受损的重原因之一,是当前防治脑血管疾病的热点。奥扎格雷钠是一种特异性血栓A2(TXA2)合成酶抑制剂,能降低TXA2浓度,促进前列环素I2(PGI2)的生成,并维持二者间的平衡,还能选择性地扩张血管,改善脑组织微循环和能量代谢,抗血小板聚集,有效地抑制血栓形成1-3。奥扎格雷钠目前已广泛用于治疗缺血性脑血管病,本研究采用大鼠脑缺血再灌注病理模型,观察奥扎格雷钠对脑缺血再灌注后神经细胞的保护作用,为临床应用提供理论依据。现报道如下
  1 材料与方法
  1.1 材料
  健康雄性Wistar大鼠84只,质量210~270 g,由山东省实验动物中心提供,随机分为盐水对照组(32只)、假手术组(20只)、奥扎格雷钠治疗组(32只),观察3组仅缺血90 min(IR 0 h)和再灌注24 h(IR 24 h)两个时段的神经细胞凋亡数和凋亡率。
  1.2 方法
  大鼠脑缺血再灌注模型制作及给药 采用Longa Z等4报道的方法进行改进,术中室温保持24℃。用大鼠大脑中动脉线栓法(MCAO)制备脑缺血再灌注大鼠模型,具体操作如下用6%水合氯醛(0.4~0.5 mL/100 g)腹腔内注射麻醉,取颈部正中切口,暴露颈总动脉,于其深处用细线穿住,分离颈内外动脉,于颈外动脉切一小口,用插线插入至颈总动脉,并下拉,由分叉处插入颈内动脉,然后收紧活结,松开颈总动脉夹,抽出深处的细线,缝合切口。栓塞2 h后进行长达12 h的再灌注。假手术组仅分离双侧颈总动脉,不阻断血流5。脑缺血的大鼠麻醉清醒后,具备向左侧转弯,左前肢不能伸直为研究对象。假手术组大鼠栓子插入仅9 mm。治疗组大鼠,于缺血前半小时和缺血后,分别向腹腔注射奥扎格雷钠水溶液(2 mg/kg)各一次,假手术组及对照组脑缺血大鼠,均在相同时间点,分别向腹腔注射等量的0.9%氯化钠注射液。
  1.3 观察指标
  1.3.1 神经功能评分 0分无神经损伤体征;1分提尾时不能完全伸直对侧前爪;2分行走时向外侧转圈;3分站立时向对侧倾斜;4分不能行走,意识丧失。
  1.3.2 细胞凋亡测定 在相应时间点,各组大鼠于评分后,分别取5只,麻醉处死。经枕骨大孔撑开颅骨,小心取处脑组织,迅速取出缺血边缘区新鲜脑组织50 mg,置于5℃ 75%乙醇中处理,用流式细胞仪(FACS420,山东省肿瘤研究所)检测细胞凋亡率。细胞凋亡率=凋亡细胞数/细胞总数×100%。
  1.3.3 脑梗死体积测定 在预定时间点,治疗组和对照组各取6只大鼠,麻醉后断头处死,迅速取脑,置于冰箱中0.5 h后,在额极后,每间隔2 mm,连续取5个冠状脑切片,将切好的脑片立刻置于37℃ 2%红四氮唑磷酸缓冲液中避光,恒温孵育30 min,染色后,经10%多聚甲醛液固定24 h后封片,用球积分析仪系统进行分析,计算出梗死体积3。
  1.4 统计学方法
  采用SPSS 17.0 软件对所得数据进行统计分析,检测结果以均数±标准差表示,组间比较用t检验。
  2 结果
  2.1 各组大鼠脑梗死体积与神经功能评分比较
  奥扎格雷钠治疗组和对照组大鼠脑组织有缺血性的梗死灶,和MCA支配区域一致,奥扎格雷钠治疗组大鼠脑梗死体积为(107.9±12.1) mm3,明显小于对照组的(150.3±30.5) mm3(P < 0.05)。假手术组大鼠肢体无神经损伤体征,神经功能评分正常。对照组大鼠脑神经功能评分为(2.83±0.75)分,奥扎格雷钠治疗组为(1.83±0.75)分,两组比较差异有统计学意义(P < 0.05)。